Phân lập và xác định virus
Bệnh phẩm
– Bệnh nhân: lấy 2-4 ml máu trong giai đoạn sốt chưa quá 4 ngày kể từ cơn sốt đầu, có chất chống đông.
– Tử thi, lấy tổ chức gan, lách, hạch lympho… cần lấy ngay sau khi chết chưa quá 6 giờ, được bảo quản trong glycerin 50%.
– Vectơ: bắt 20-40 con muỗi A. aegypti.
Bệnh phẩm được bảo quản lạnh, riêng muôi giữ cho sống, ghi rõ tến, tuổi, giới tính, số bệnh phẩm, địa chỉ, ngày phát bệnh, ngày vào viện, ngày lấy bệnh phẩm và những dấu hiệu lâm sàng chính rôi gửi ngay tới phòng xét nghiệm.
Phân lập virus
Hiện nay người ta thường dùng 3 kỹ thuật để phân lập virus Dengue:
– Kỹ thuật phân lập trên chuột nhắt trắng 1-3 ngày tuổi: bệnh phẩm được tiêm vào não chuột 1-3 ngày tuổi, theo dõi hàng ngày. Nếu chuột bị bệnh, chuột sẽ liệt 2 chi sau. Mổ lấy não để tiêm tiếp hai lần nữa. Sau khi gây nhiễm 1 tuần, nếu chuột không ốm cũng mổ để lấy não phát hiện virus. Dùng kỹ thuật này, người ta đã phân lập được cả 4 týp virus Dengue, nhưng kỹ thuật này đời hỏi nhiều thời gian, độ nhạy thấp, lại tốn kém, do đó ít được dùng.
– Kỹ thuật phân lập trên muỗi sống: bệnh phẩm tiêm vào ngực muỗi Toxorhynchites. Sau khi tiêm, nuôi muỗi trong lồng ở 28°c trong 14 ngày, bắt những con muỗi còn sống, giữ trong – 70°c để xác định virus. Phương pháp này có độ nhạy cao nên được dùng trong các trường hợp quan trọng như: xuất huyết nặng, hoặc những trường hợp nguy kịch có thể dẫn đến tử vong.
– Kỹ thuật phân lập trên tế bào nuôi: cho bệnh phẩm vào tế bào nuôi một lớp C6/36. Sau 7 ngày, thu hoạch tế bào để xác định virus. Phương pháp này giúp cho việc phân lập virus được nhanh hơn và ít tốn kém hơn, tuy nhiên nó không nhạy bằng phương pháp gây nhiễm trực tiếp vào muỗi.
Bệnh phẩm
– Bệnh nhân: lấy 2-4 ml máu trong giai đoạn sốt chưa quá 4 ngày kể từ cơn sốt đầu, có chất chống đông.
– Tử thi, lấy tổ chức gan, lách, hạch lympho… cần lấy ngay sau khi chết chưa quá 6 giờ, được bảo quản trong glycerin 50%.
– Vectơ: bắt 20-40 con muỗi A. aegypti.
Bệnh phẩm được bảo quản lạnh, riêng muôi giữ cho sống, ghi rõ tến, tuổi, giới tính, số bệnh phẩm, địa chỉ, ngày phát bệnh, ngày vào viện, ngày lấy bệnh phẩm và những dấu hiệu lâm sàng chính rôi gửi ngay tới phòng xét nghiệm.
Phân lập virus
Hiện nay người ta thường dùng 3 kỹ thuật để phân lập virus Dengue:
– Kỹ thuật phân lập trên chuột nhắt trắng 1-3 ngày tuổi: bệnh phẩm được tiêm vào não chuột 1-3 ngày tuổi, theo dõi hàng ngày. Nếu chuột bị bệnh, chuột sẽ liệt 2 chi sau. Mổ lấy não để tiêm tiếp hai lần nữa. Sau khi gây nhiễm 1 tuần, nếu chuột không ốm cũng mổ để lấy não phát hiện virus. Dùng kỹ thuật này, người ta đã phân lập được cả 4 týp virus Dengue, nhưng kỹ thuật này đời hỏi nhiều thời gian, độ nhạy thấp, lại tốn kém, do đó ít được dùng.
– Kỹ thuật phân lập trên muỗi sống: bệnh phẩm tiêm vào ngực muỗi Toxorhynchites. Sau khi tiêm, nuôi muỗi trong lồng ở 28°c trong 14 ngày, bắt những con muỗi còn sống, giữ trong – 70°c để xác định virus. Phương pháp này có độ nhạy cao nên được dùng trong các trường hợp quan trọng như: xuất huyết nặng, hoặc những trường hợp nguy kịch có thể dẫn đến tử vong.
– Kỹ thuật phân lập trên tế bào nuôi: cho bệnh phẩm vào tế bào nuôi một lớp C6/36. Sau 7 ngày, thu hoạch tế bào để xác định virus. Phương pháp này giúp cho việc phân lập virus được nhanh hơn và ít tốn kém hơn, tuy nhiên nó không nhạy bằng phương pháp gây nhiễm trực tiếp vào muỗi.
Định loại virus
Sau khi nuôi cấy phân lập được virus, chúng ta phải định loại virus. Hiện nay có 4 kỹ thuật thường dùng:
– Kỹ thuật kết hợp bổ thể.
– Kỹ thuật trung hoà giảm mảng hoại tử:
Kỹ thuật này dựa trên nguyên tắc: khi virus nhiễm vào tế bào thì virus sẽ tạo ra những mảng hoại tử (plaque) trên các tế bào nuôi cấy một lớp cảm thụ. Những mảng hoại tử này bị trung hoà bởi sự có mặt của các kháng thể đặc hiệu đã biết.
– Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trực tiếp.
– Kỹ thuật khuếch đại chuỗi gen (PCR).
Đọc thêm tại:
- http://blogvisinhvat.blogspot.com/
- http://blogvisinhvat.blogspot.com/2015/04/trieu-chung-benh-viem-nao-nhat-ban.html
- http://blogvisinhvat.blogspot.com/2015/05/kha-nang-gay-benh-cua-viruts-dengue.html
0 nhận xét:
Đăng nhận xét